Объекты люминесцентной микроскопии
Собственная (первичная) люминесценция присуща только некоторым структурам в исследуемых микроскопических препаратах. Большинство веществ биологического происхождения имеет весьма мало интенсивную голубую, синюю или фиолетовую люминесценцию (максимумы в спектрах люминесценции многих из них лежат в ультрафиолетовой области спектра), поэтому возбуждать люминесценцию биологических объектов необходимо ультрафиолетовым светом, а в качестве «запирающего» светофильтра выбирать такой, который отсекает только ультрафиолет.
Природными люминесцирующими веществами растительной клетки являются хлорофилл, порфирин, фикоэритрин, а также клетчатка, пектин, хитин. Представители разных систематических отделов растений обладают различным набором хлорофиллов и фикобилинов. Диффузное распределение пигментов, специфичное для клеток водорослей, вызывает свечение самих клеток. У высших растений наблюдается свечение пластид. Пигментный состав, а значит и спектральные характеристики, в том числе люминесцентные, одноклеточных водорослей более вариабельны, чем у многоклеточных водорослей и высших растений, и в большей степени зависят от условий обитания, возраста, сезона года и т.д. [1]
Некоторые витамины (А, В2), пигменты (липофусцины, хлорофилл), а так же другие вещества под влиянием более или менее длительного освещения ультрафиолетовым излучением претерпевают фотохимические изменения и перестают люминесцировать. Поэтому микроскопирование таких веществ следует проводить по возможности быстро, часто меняя места наблюдения в исследуемом объекте. [2]
В настоящее время люминесцентная микроскопия находит всё более широкое применение в различных областях научной и практической работы: в вирусологии, гистологии (нормальной и патологической), физиологии, ботанике, онкологии, радиобиологии, а так же при проведении лабораторно-клинических анализов, в санитарных и судебно-медицинских исследованиях. Большой интерес представляет предложенный Кунсом и его сотрудниками исключительно чувствительный люминесцентно-иммунохимический метод меченых антител.
Люминесцентная микроскопия, наряду с другими флуоресцентными методами, применяется в физиологии растений. Часто объектами исследований являются представители растительных сообществ водоёмов: фитопланктона, фитобентоса, фитообрастаний, макрофиты, донные отложения, а также лабораторные культуры водорослей. Например, для тестирования вод различной степени загрязнённости перспективно использовать альгологически чистые культуры зелёных водорослей Scenedesmus quadricauda и Chlorella vulgaris, синезелёной водоросли Microcystis aeruginosa, а так же культуру морской жёлто-зелёной водоросли Phaeodactilum tricornutum. Зелёные и сине-зелёные водоросли повсеместно распространены в водоёмах умеренной зоны, а жёлто-зелёные водоросли широко представлены в морях. [12]